Dispendix I

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Dispendix I

2023-04-21 09:20| 来源: 网络整理| 查看: 265

I-DOT qPCR操作流程详解

我们以如下一个复杂的384孔的qPCR实验为例,整板实验包含了对8个cDNA模板进行16个引物对的检测,每个组合设置了3个副孔的实验。设定实验总体积为10ul,其中含有DNA结合探针/染料的Master mix为5ul,cDNA模板3ul,引物2ul(此处为了简化模拟实验模型,将相对均匀地分配10ul体系的组合,实际情况中,会使用到更低体积的模板或者引物)。

01- 排兵布阵

在软件Target Layout中通过选择、复制、移动的方式设置实验孔在qPCR板中的分布图,如上复杂的384实验设置在5分钟内可完成,设置完成后,软件记录了每个孔需要使用到的Master mix的体积,模板的种类和体积,引物的种类和体积,并同步计算整块384孔板所使用到的所有的液体种类和体积。无需任何人工计算。

02- 自动分配

在软件Source Layout中对照分布图,使用移液器将对应的液体种类的对应体积加入到对应的96孔pure plate板(母液板)中

03- 对号入座 & 模拟分配

将全新的qPCR板和已经加入待分配液体的pure plate板放入I DOT机器中,在Overview界面检查模板设置和进行模拟分配(模拟分配也可省略)

04- 一键启动

启动液体分配工作,5~15分钟完成自动分液工作。

05- 分配完成 & 质量监控

I-DOT软件的DropDetection功能可实时监测分液过程中的每一滴液滴,以及液滴中的气泡,这一简单有力的工具确保了液滴的有效分配和实验的最优化。DropDetection通过嵌置在样品板下方的电路板形成96个微小的光路屏障,检测不同位置样品孔中喷射出的液滴通过光路屏障时光强度的变化。在液体分配结束后,DropDetection可提供基于颜色编码或文本的监测数据。

*绿色代表滴液分配通过质控,红色代表发生错误,并且告知可能的原因

I-DOT 应用于qPCR的优势

· 直接分配原液,无需配置母管稀释液/混合液

· Pure plate孔的死体积



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